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八十年代集單克隆抗體、熒光化學(xué)、激光、計(jì)算機(jī)等高技術(shù)發(fā)展起來的一種先進(jìn)儀器，已廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、生物化學(xué)、生物學(xué)、腫瘤學(xué)以及血液學(xué)等方面的研究和臨床常規(guī)工作。其中檢測(cè)人白細(xì)胞表面標(biāo)志可對(duì)白血病、淋巴瘤作用迅速正確的診斷，對(duì)淋巴細(xì)胞群和亞群進(jìn)行精確分類，還能分離純化某一群或亞群細(xì)胞。

活細(xì)胞免疫熒光技術(shù)是用于FCM檢測(cè)的標(biāo)本準(zhǔn)備，染色后也能在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察，在某些實(shí)驗(yàn)條件下，活細(xì)胞免疫熒光染色后的特異性和敏感性要優(yōu)于滴片固定的常規(guī)間接免疫熒光的結(jié)果。

活細(xì)胞表面保留有較完整的抗原或受體，先用特異性鼠源性單克隆抗體與細(xì)胞表面相應(yīng)抗原結(jié)合，再用熒光標(biāo)記的第二抗體結(jié)合，根據(jù)所測(cè)定的熒光強(qiáng)度和陽性百分率即可知相應(yīng)抗原的密度和分布。

1.各種特異性單克隆抗體。

2.熒光標(biāo)記的羊抗鼠或兔抗鼠第二抗體，滅活正常兔血清(見附錄)。

3.10％ FCS RPMI 1640, DPBS、洗滌液、固定液。

4.流式細(xì)胞管、EP管、移液器、離心機(jī)、熒光顯微鏡等。

制備活性高的細(xì)胞懸液(培養(yǎng)細(xì)胞系、外周血單個(gè)核細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、脾細(xì)胞等均可用于本法)

5×106～１×107/mL
取40μL細(xì)胞懸液加入預(yù)先有特異性McAb(5～50μL)的小玻璃管或塑料離心管，再加50μL1∶20(用DPBS稀釋)滅活正常兔血清

（4℃ 30min）

用洗滌液洗滌2次，每次加洗滌液2mL左右

1000rpm×5min
棄上清，加入50μL工作濃度的羊抗鼠(或兔抗鼠)熒光標(biāo)記物，充分振搖

（4℃ 30min）

用洗滌液洗滌2次，每次加液2mL左右

1000rpm×5min
加適量固定液(如為FCM制備標(biāo)本，一般加入1mL固定液，如制片后在熒光顯微鏡下觀察，視細(xì)胞濃度加入100～500μL固定液)

FCM檢測(cè)或制片后熒光顯微鏡下觀察

(標(biāo)本在試管中可保存5～7天)

附錄:

1. DPBS (×10, 貯存液)

NaCl：80g

KCl：2g  蒸餾水加至1000mL

Na2HPO4：11.5g  臨用時(shí)用蒸餾水1∶10稀釋

KH2PO4：2g

2.洗滌液

DPBS：900mL

FCS：50mL (終濃度5％)

4％NaN3：50mL (終濃度0.2％)

3.固定液

DPBS：1000mL

葡萄糖：20g (終濃度2％)

甲醛：10mL

NaN3：0.2g (終濃度0.02％)