耗材常說(shuō)的無(wú)熱原、無(wú)核酶、無(wú)內(nèi)毒素究竟是什么意思
不知道大家平時(shí)有沒(méi)有經(jīng)常采購(gòu)耗材的需求,如果是經(jīng)常采購(gòu)實(shí)驗(yàn)室耗材的人可能會(huì)發(fā)現(xiàn),各個(gè)廠(chǎng)家可能都會(huì)給產(chǎn)品標(biāo)榜上無(wú)酶無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素的標(biāo)簽,
特別是涉及到一些細(xì)胞生物學(xué)和分析生物學(xué)的耗材更是如此,例如常見(jiàn)的15ml和50ml離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、細(xì)胞培養(yǎng)皿、細(xì)胞培養(yǎng)板、凍存管、PCR板等
等產(chǎn)品。而有這些描述的產(chǎn)品通??赡芤矔?huì)比普通的同類(lèi)產(chǎn)品貴一些。那么這些說(shuō)法到底是什么意思,又對(duì)我們的實(shí)驗(yàn)有什么影響呢?我們
平時(shí)在進(jìn)行采購(gòu)的時(shí)候應(yīng)該如何進(jìn)行選擇,這里就給大家簡(jiǎn)單介紹下。
定義
1
熱原
熱原指注入機(jī)體后能引起人體體溫異常升高的致熱物質(zhì)。廣義的熱原包括細(xì)菌性熱原、內(nèi)源性高分子熱原、內(nèi)源性低分子熱原及化學(xué)熱原等。這里所指的
“熱原”,主要是指細(xì)菌性熱原,是某些微生物的代謝產(chǎn)物、細(xì)菌尸體及內(nèi)毒素。
2
酶
酶大家在初中就學(xué)過(guò),作為一種生物催化劑,酶能夠高效催化我們生物體內(nèi)各種生化反應(yīng)的進(jìn)行。然而大部分產(chǎn)品所說(shuō)的無(wú)酶,實(shí)際上更準(zhǔn)確點(diǎn)說(shuō)并不是指
所有酶,而是指核酸酶,很多廠(chǎng)家也寫(xiě)成DNase-free和RNase-free,都是代表的一個(gè)意思。核酸酶能夠分解核酸分子,有專(zhuān)一性降解DNA或RNA,也有專(zhuān)
一性較低可同時(shí)作用于DNA和RNA分子的酶。
3
內(nèi)毒素
內(nèi)毒素為革蘭氏陰性菌的菌體中存在的毒性物質(zhì)的總稱(chēng)。是多種革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁成分,由菌體裂解后釋出的毒素,成分為脂多糖。一般認(rèn)為內(nèi)毒素為熱
原的一種,藥品生產(chǎn)的時(shí)候通??梢越邮埽翰淮嬖趦?nèi)毒素則不存在熱原,因此在生產(chǎn)的時(shí)候可能只進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)而不進(jìn)行熱原檢測(cè)。
影響
熱原和內(nèi)毒素能夠刺激機(jī)體,引起機(jī)體發(fā)熱。在制藥、臨床等領(lǐng)域,為了人的安全,通常對(duì)熱原和內(nèi)毒素的量有所要求。在中國(guó)藥典中對(duì)于熱原和內(nèi)毒素的檢
測(cè)也都給到了明確的方法。而核酸酶在涉及到分子學(xué)實(shí)驗(yàn)室的時(shí)候,因?yàn)槠渚哂蟹纸釪NA的作用,很可能使目標(biāo)分子片段被降解,例如PCR實(shí)驗(yàn)中,如果收到
核酸酶的污染有可能無(wú)CT值,從而產(chǎn)生假陽(yáng)性的結(jié)果。所以像吸頭、PCR相關(guān)的耗材通常都是無(wú)核酸酶的。
關(guān)于熱原和內(nèi)毒素的檢測(cè)
下面簡(jiǎn)單介紹下藥典中對(duì)熱原和內(nèi)毒素檢測(cè)的內(nèi)容。
1
熱原檢測(cè)
中國(guó)藥典1142通則中描述了使用家兔法進(jìn)行熱原檢測(cè)。使用健康合格的家兔,將一定劑量的供試品,靜脈注入家兔體內(nèi),在規(guī)定時(shí)間內(nèi),觀(guān)察家兔體溫升高的
情況。與供試品接觸的試驗(yàn)用器皿應(yīng)無(wú)菌、無(wú)熱原。去除熱原通常釆用干熱滅菌法(250℃、30分鐘以上),也可用其他適宜的方法。如果受試的家兔在一定
時(shí)間內(nèi)的體溫升高到一定標(biāo)準(zhǔn),則認(rèn)為供試品的熱原檢查不符合規(guī)定。
2
內(nèi)毒素檢測(cè)
內(nèi)毒素檢測(cè)以前國(guó)際上都使用鱟試劑法進(jìn)行檢測(cè)。具體方法有凝膠法和光度測(cè)定法,鱟試劑可以與細(xì)菌內(nèi)毒素發(fā)生凝集反應(yīng),產(chǎn)生凝膠或者發(fā)生濁度變化,通過(guò)測(cè)
定這種變化測(cè)定內(nèi)毒素含量。鱟試劑是從海洋節(jié)肢動(dòng)物鱟的血液中提取制成的一種試劑,因此鱟在世界范圍內(nèi)遭到大量捕殺,在我國(guó)也成為了國(guó)家二級(jí)保護(hù)動(dòng)物。
目前FDA已經(jīng)批準(zhǔn)了重組C因子法,替代了鱟試劑。我國(guó)藥典的指導(dǎo)原則中也已提到該法。
如何進(jìn)行選擇
其實(shí)了解了這幾個(gè)概念之后如何進(jìn)行選擇也就不難了。主要還是根據(jù)自己的需求來(lái)選擇。通常無(wú)酶和熱原的耗材較為常見(jiàn),無(wú)內(nèi)毒素的產(chǎn)品相對(duì)較少。如果實(shí)驗(yàn)
本身對(duì)于這些沒(méi)有較高要求,其實(shí)可以選用普通耗材,舉個(gè)例子在做離心的時(shí)候,如果是離心細(xì)胞或者相關(guān)成分最好選用無(wú)酶和熱原的離心管,而如果只是普通
的液體離心實(shí)際上普通離心管即可。
另外這也是很多使用者會(huì)產(chǎn)生的問(wèn)題,就是在向一些商家采購(gòu)離心管的時(shí)候會(huì)問(wèn)該離心管能否重復(fù)使用,這個(gè)問(wèn)題實(shí)際上要因情況而議,因?yàn)殡x心管在使用過(guò)一
次之后就已經(jīng)在一定程度上被污染了,而且即使進(jìn)行壓力蒸汽滅菌也無(wú)法完全消除這些污染,因此再次使用的話(huà)需要看使用者自己對(duì)實(shí)驗(yàn)的需求了。
歸根結(jié)底,所有的產(chǎn)品都是為實(shí)驗(yàn)者和實(shí)驗(yàn)服務(wù),不能因?yàn)楫a(chǎn)品而影響自己的實(shí)驗(yàn),而是需要根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)去選擇合適的和產(chǎn)品即可。
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